常见问题
多肽的溶解度很大程度上取决于多肽的极性。酸性蛋白质溶解在碱性溶液中,而碱性蛋白质可以溶解在酸性溶液中。含有大量不带电荷的极性氨基酸残基或疏水性氨基酸的疏水性多肽和中性多肽可以溶解在少量的有机溶剂如DMSO、DMF、乙酸、乙腈、甲醇、丙醇或异丙醇中,然后用水 (蒸馏水) 稀释。含有甲硫氨酸或半胱氨酸的肽不应溶解在DMSO中,因为DMSO可引起侧链的氧化。
肽溶解测试: 在肽溶解之前,取一小部分肽用于肽溶解测试。您需要测试几种不同的溶剂,直到找到最合适的溶剂 (基于实验需要和溶解度测试)。超声处理有助于破碎颗粒并增加溶解度。(注意: 超声处理可引起溶液加热和肽降解。)
1.将值-1分配给每个酸性氨基酸,包括天冬氨酸 (D),谷氨酸 (E) 和C端-COOH。将值1分配给每个碱性氨基酸,包括精氨酸 (R),赖氨酸 (K),组氨酸 (H) 和N-末端-nh2。然后计算整个肽的电荷。
2.如果整个肽的电荷带正电荷,则该肽是碱性的。尝试先将肽溶解在蒸馏水中; 如果不溶于水,则尝试将其溶解在少量10% 25% 的乙酸中。如果仍然失败,则添加一些TFA (10-50微升) 以增加溶解度,然后用水稀释至所需浓度。
3.如果整个肽带负电荷,则该肽是酸性的。先尝试将其溶于蒸馏水中; 如果不溶于水,则尝试将其溶于PBS (PH 7.4) 中,如果再次不溶,则加入少量碱性溶剂,例如0.1 M碳酸氢铵,然后用水稀释至所需浓度。含有游离半胱氨酸的肽应溶解在脱气的酸性缓冲液中,因为当pH大于7时,巯基被迅速氧化成二硫化物。
4.如果整个肽的电荷为零,则该肽是中性的。中性肽通常可溶于有机溶剂。首先,尝试添加少量乙腈,甲醇或异丙醇。对于高度疏水的肽,可以使用少量二甲基亚砜溶解,然后用水稀释至所需浓度。对于含有游离半胱氨酸的肽,需要DMF而不是DMSO。对于具有聚集趋势的肽,加入6 m盐酸胍或8 m尿素,然后根据需要稀释。
为了防止或最小化肽降解,将肽作为冻干粉末储存在-20 °C,-80 °C是优选的。如果需要储存溶液肽,最好将其储存在小样品中,以避免重复冷冻和解冻。一个解冻和未使用的样品应扔掉。细菌降解有时可能是溶液肽的问题,因此请将肽溶解在无菌水中或过滤肽溶液以去除细菌。
碱性氨基酸: K,R,H,N-末端
氨基酸: D,E,C-末端
极性中性氨基酸: S,N,Q,T,C,P
非极性疏水氨基酸: G,A,M,F,W,V,Y,I,L乙酰基,酰胺基
示例:
KEYEFILGASRHD :( 5) (-4) = 1考虑碱性肽,参见步骤2。
地球膜GASEHK :( 4) (-5) = -1考虑酸性肽,参见步骤3
ACDEFILM GASE :( 4) (-4) = 0被认为是中性肽,参见步骤4。
通常,酸性和碱性氨基酸的数量超过氨基酸总数的50%,并且可以用水溶解。
肽产品的稳定性不仅与肽的序列有关,而且很大程度上取决于生产工艺,不同工艺得到的产品稳定性差异很大,尤其是含有Cys、Gln、Met、Asn和Trp等氨基酸的序列。
需要长期保存的肽应以冻干粉末的形式保存在装有干燥剂的密封容器中,温度为-20 ℃,-80 ℃ 更好,这样可以最大程度地避免肽的降解。这种储存允许肽保存数年,避免细菌降解和氧化,以及避免二级结构的形成。如果序列中含有Cys和Met等易氧化的氨基酸,建议在充氮后低温保存。
化学合成的肽通常带有游离氨基和游离羧基。肽的序列通常代表亲本蛋白质的序列。为了更接近亲本蛋白,肽末端往往需要封闭,即N末端乙酰化和C末端酰胺化,这些修饰会减少肽的总电荷,降低肽的溶解度,并且还使肽能够模拟其母体蛋白质中 α-氨基酸和羧酸基团的原始状态。
如果需要N-末端的乙酰化修饰或C-末端的酰胺化修饰,请在下订单时注明。一旦合成开始,C-末端酰胺化不能被修饰; 一旦合成完成,N-末端乙酰化不能被修饰。
肽生产的难度与其设计的序列直接相关,我们的技术人员可以更准确地预测。如果设计的序列难以生产,不仅会影响实验的进度,而且有时即使生产了产品,在使用中也会面临各种问题,特别是溶解度问题。
基于它们的序列可以预测大多数肽是可溶的,一些序列更难以确定它们的溶解度并且需要实验确认。当您设计序列时,我们可以为您提供更流畅的实验建议。
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